201001261552冷光偵測系統

那天在國防醫學院一位做冷光實驗的助理在詢問機器 I Control操作軟體介面在LuminescenceLuminescence Dual Color選項的差異,其中,Luminescence就是單指測量一般實驗室最常使用的冷光Luciferase reporter gene系統

Luminescence Dual Color就指利用機器內建的光源篩選濾鏡,來分離雙色發光的系統,可方便分析在同一盤樣品中產生兩種冷光的Dual Reporter Gene Assays

以大家最耳熟能詳的試劑P廠牌,在雙色冷光系統Dual Reporter Gene又可區分兩大種類,以商品名來區分,主要就是Dual-Luciferase® ReporterChroma-Glo Luciferase

 Dual-Luciferase® Reporter,主要可分別測得Firefly luciferaseRenilla luciferase酵素活性,其中,測量Renilla luciferase冷光訊號,主要是用來當作Internal Control,已得知transfection efficiency在以機器操作層面來看,就必須要分別透過兩支Injector分注器分注各自的反應受質(substrate),先偵測Firefly酵素活性,之後在利用第二支Injector分注加入另一組反應受質,除了可終止Firefly酵素活性外,還可以啟動Renilla酵素活性,最後再將分析結果所測得的Firefly Renilla luciferases 活性相除以得到相對冷光酵素活性表現

Chroma-Glo Luciferase,也是一樣,可以測得兩種冷光酵素表現,pCBRluc(紅色的發光)以及pCBGluc(綠色的發光)主要的差異就是實驗反應過程中只需要加入一種反應受質(substrate),即可同時產生紅色和綠色冷光訊號以機器操作層面來看,並不需要透過Injector做任何分注指令,只要在加入反應受質後,透過機器內建的Filter Wheel,透過濾鏡來分離紅色以及綠色的光源訊號,這樣兩種冷光表現就可以獨立而且同時被偵測。看看這張圖秀出CBRluc和CBRluc的光譜波峰圖

而回歸到Plate Reader的判讀層面,TECAN機器在冷光規格上,還有需多貼心的設計概念,不同於市售一般多功能螢冷光儀,大多共用一組PMT為偵測器TECAN的冷光採用同等單冷光儀的Photon Counting System with low dark current PMT-單光子計數器可精確讀取訊號較弱之冷光讀值。

 


內建的Filter Wheel應用在雙色冷光實驗

Green (510~540nm, Chroma-Glo, BRET2)

Magenta (375~450/ 610~700nm, Chroma-Glo, BRET2)

Blue1 (370~480nm, BRET)

Green1 (520~570, BRET)

讀取頭高度甚至可依據不同廠牌的微量盤自動調整最佳的Z軸讀取高度,此功能可有效降低冷光樣品自發光的相互干擾,提高冷光偵測靈敏度。

現在,無論您實驗室的冷光是採用何種系統,只讀取單一Luciferase酵素活性,或是利用雙色冷光偵測兩種酵素活性,一台TECAN Infinite 就可以完全滿足您的需求。

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